核酸檢測試劑使用培訓方案

『壹』 核酸檢測具體步驟

1、核酸提取使用硅膠柱離心、磁性硅膠顆粒分離方法以及自動化儀器等商品化試劑或設備並按說明書操作。提取RNA時應注意防止RNA降解。DNA應置於-20℃保存，RNA和需長期保存的DNA應置於-80℃保存。

2、逆轉錄合成cDNA。逆轉錄cDNA合成反應需使用逆轉錄引物、dNTPs、逆轉錄酶、RNA酶抑制劑、DTT、緩沖液和適量無RNA/DNA酶的超純水以及RNA模板。在擴增儀或水浴箱中，在規定的溫度和時間下進行逆轉錄反應。

3、PCR擴增反應PCR反應需使用引物、dNTPs、DNA聚合酶、緩沖液、和適量無RNA/DNA酶超純水、以及模板。在擴增儀中，按照設定的程序進行擴增。使用二次擴增的套式PCR擴增方法。

4、擴增產物定性分析；擴增產物常用分析方法是瓊脂糖凝膠電泳法，與分子量標准比較，判斷擴增片段是否在預期的分子量范圍內。其它擴增產物分析方法還有限制性內切酶酶切分析、特異性探針雜交分析以及DNA序列分析等。

5、結果判定和完成報告單：每一次檢測需同時做兩個陽性對照、兩個陰性對照，只有陽性對照擴增出預期的片段、陰性對照沒有擴增出任何片段、雙份平行樣品結果一致的情況下實驗才成立，可以作出核酸陽性或陰性反應結果的判定。

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檢測新型冠狀病毒特異序列的方法最常見的是熒光定量PCR。因PCR反應模板僅為DNA，因此在進行PCR反應前，應將新型冠狀病毒核酸逆轉錄為DNA。在PCR反應體系中，

包含一對特異性引物以及一個Taqman探針，該探針為一段特異性寡核苷酸序列，兩端分別標記了報告熒光基團和淬滅熒光基團。探針完整時，報告基團發射的熒光信號被淬滅基團吸收；

如反應體系存在靶序列，PCR反應時探針與模板結合，DNA聚合酶沿模板利用酶的外切酶活性將探針酶切降解，報告基團與淬滅基團分離，發出熒光。

每擴增一條DNA鏈，就有一個熒光分子產生。熒光定量PCR儀能夠監測出熒光到達預先設定閾值的循環數與病毒核酸濃度有關，病毒核酸濃度越高， Ct值越小。不同生產企業的產品會依據自身產品的性能確定本產品的陽性判斷值。

『貳』 核酸檢測流程是什麼

1、核酸提取使用硅膠柱離心、磁性硅膠顆粒分離方法以及自動化儀器等商品化試劑或設備並按說明書操作。提取RNA時應注意防止RNA降解。DNA應置於-20℃保存，RNA和需長期保存的DNA應置於-80℃保存。

2、逆轉錄合成cDNA。逆轉錄cDNA合成反應需使用逆轉錄引物、dNTPs、逆轉錄酶、RNA酶抑制劑、DTT、緩沖液和適量無RNA/DNA酶的超純水以及RNA模板。在擴增儀或水浴箱中，在規定的溫度和時間下進行逆轉錄反應。

3、PCR擴增反應PCR反應需使用引物、dNTPs、DNA聚合酶、緩沖液、和適量無RNA/DNA酶超純水、以及模板。在擴增儀中，按照設定的程序進行擴增。使用二次擴增的套式PCR擴增方法。

4、擴增產物定性分析；擴增產物常用分析方法是瓊脂糖凝膠電泳法，與分子量標准比較，判斷擴增片段是否在預期的分子量范圍內。其它擴增產物分析方法還有限制性內切酶酶切分析、特異性探針雜交分析以及DNA序列分析等。

5、結果判定和完成報告單：每一次檢測需同時做兩個陽性對照、兩個陰性對照，只有陽性對照擴增出預期的片段、陰性對照沒有擴增出任何片段、雙份平行樣品結果一致的情況下實驗才成立，可以作出核酸陽性或陰性反應結果的判定。

『叄』 核酸檢測流程

1、首先，醫務人員會使用咽拭子擦拭受檢者鼻腔或者喉嚨扁桃體處，採集唾液分泌物，這個過程其實蠻疼的。

『肆』 高鐵站核酸檢測流程

對於一般的核酸檢測在采樣之後，都是在第二天才能收到結果，這都算是比較快的。因為核酸檢測，其中包括了很多步驟和很多實驗室的工作。

比如在采樣之後，如果是血液、咽拭子等，當然是怕這些樣本降解。如果是RNA可能是比較不穩定，需要快速運輸到檢測的實驗室之後進行了很多處理，包括了前處理，然後裂解、打開、離心，上清液進行PCR就聚合酶鏈式反應等等。

這些都有可能有很長的時間，比如PCR的反應時間可能是6~8小時，然後才能讀取結果。讀取之後有初步的結果還要進行審核，這流程整個需要很長時間。而審核的時候，如果要是再有問題，可能還要留出復檢的時間，不可能很快的下發結果。所以一般檢測，大約在第二天能獲得結果。

核酸檢測操作過程需要幾個小時，一般1-2天出結果。目前新冠病毒的核酸檢測主要是使用RT-PCR法檢測試劑盒，操作是：1、檢測人員先用核酸提取試劑盒提取患者標本里的核酸。2、把提取到的核酸放進檢測試劑中復制。3、結果判定。第1步和第2步都有嚴格的操作流程和操作條件，整體耗時在1-4小時之間，最後判定結果。醫院的檢測是上午統一上機，到統一出結果差不多5個小時，也就到了下午，然後統一上報，不會隨到隨檢。所以下午或晚上所送的標本是第2天做，有的醫院自己不具備實驗室條件，不能做，需送到上一級實驗室做，保守估計時間是1-2天。

『伍』 核酸檢測注意事項

在核酸檢測前兩小時，請勿進食，為避免影響檢測結果，采樣前30分鍾請勿吸煙、喝酒和嚼口香糖；為降低交叉感染風險，所有檢測者需配戴口罩並備一個用，在采樣結束後進行替換。

在採集鼻咽拭子前檢測者應告知採集人員是否存在鼻中隔彎曲或有鼻腔手術史，過程中可能出現鼻部酸癢感，刺激打噴嚏，請立即用紙巾或手肘遮擋。采樣時人與人之間請保持一米以上距離。

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對於新型冠狀病毒的核酸檢測，首先根據試劑盒說明書」樣本要求「部分進行樣本採集，常規的樣本類型包括咽拭子、鼻拭子、痰液、支氣管灌洗液、肺泡灌洗液等。

獲得患者樣本後，需盡快進行檢測，如無法立即檢測需要轉運的樣本，應按照說明書的要求進行低溫封裝，並送到專門的檢測機構進行檢測。檢測機構收到樣本後，對樣本進行核酸提取，核酸提取試劑應使用批准產品說明書中指定的核酸提取試劑盒。

病毒RNA需要首先逆轉錄為cDNA，再進行擴增檢測。PCR擴增和檢測應使用批准產品說明書中指定的熒光定量PCR儀，通過熒光定量PCR所得到的樣本Ct值的大小，可以判斷患者樣本中是否含有新型冠狀病毒。

『陸』 核酸檢測培訓內容

為了更好地配合新冠疫情防控工作，確保臨床實驗室能夠規范、安全、有效地開展新冠病毒等感染性病原體核酸檢測工作，受江蘇省衛生健康委的委託，於2020年4月28日-29日通過網路直播的形式順利召開「新冠病毒核酸檢測實驗室技術人員培訓班」。全省二級及以上醫療機構和醫學獨立實驗室共有1881人報名參會，其中1513人參與了在線答題，1422人理論培訓成績合格。

本次培訓班邀請了省內專家針對新冠及感染性疾病的檢測作專題報告，內容涉及感染類疾病核酸檢測的基本原理、主要技術平台原理及應用、規范化實驗室的建立及其管理、生物安全防護和院內感染控制、技術操作規范、質量控制措施、結果的正確解讀和報告等多個方面。江蘇省臨床檢驗中心主任許斌教授作「新冠病毒檢測法規與策略」的報告，講解了與新型冠狀病毒相關的法規文件，強調單個標志物、單次試驗是初步結果，尚需要對病毒標志物進行驗證和確認，並介紹了新冠檢測規范化報告的流程，特別指出新冠病毒不能進行混樣檢測。

江蘇省疾病預防控制中心職業病防治所書記謝景欣教授作「感染類疾病核酸檢測實驗室生物安全管理」的報告，從實驗室的標識、物理防範措施、電源插座、通訊設備、應急處置、生物安全櫃、實驗室壓力、消毒滅菌和廢棄物處置等多個方面講解了實驗室的生物安全管理及存在的誤區。南京大學醫學院附屬鼓樓醫院感染管理辦公室主任姜亦虹教授作「新冠疫情的院感防控」的報告，介紹了新冠病毒感染流行病學特點，講解了新冠檢測的實驗室生物安全措施及注意事項，最後就新冠檢測中的常見問題進行了解答。東南大學附屬中大醫院主任吳國球教授作「新冠核酸分析前樣本的採集、處理和核酸提取」的報告，從檢驗申請、標本采樣、樣本的轉運、接收和保存、標本的前處理以及RNA的提取純化方法5個方面進行了講解，他講道選擇合適的采樣管，注意采樣時機和部位可減少假陰性，推薦使用56℃ 30分鍾的前處理以減少實驗室工作人員的職業暴露。東部戰區總醫院葯理科主任周國華教授作「新冠病毒核酸檢測方法、原理、特徵與臨床應用」的報告，講解了PCR法原理、發展歷程和在新冠病毒核酸檢測中的應用，並介紹了高通量基因檢測、第三代測序技術、恆溫擴增等多種新技術、新方法的原因和臨床應用。江蘇省臨床檢驗中心趙建華教授作「臨床基因擴增檢驗實驗室的規范建設和質量保證」的報告，從驗收流程、實驗室設置、儀器設備和人員4個方面講解了實驗室的規范化建設，然後又從試劑的選擇與性能驗證、工作程序的標准化、質量控制以及結果的判斷與報告等多個方面講解了新冠核酸檢測的質量保證。

本次培訓班是感染病專項的培訓班，經過理論培訓且成績合格的技術人員還需要到已獲得「臨床基因擴增檢驗實驗室（感染病相關基因項目）驗收合格證」的實驗室進行實驗培訓，由帶教實驗室老師和指定負責人簽名證實，將實驗記錄和工作證明掃描後發送至[email protected]，經省臨檢中心審核通過後才可以拿到合格證書，取得合格證的人員只可以從事感染病基因檢測相關的檢驗項目。

『柒』 核酸純化試劑的使用方法和注意事項有哪些

使用方法因廠家不同而不同，下面是一氪生物技術的核酸純化試劑使用方法及注意事項，供參考：

步驟一：使用無水乙醇與純化水配製70%乙醇備用。
步驟二：從2-8℃冰箱中取出磁珠懸浮液，在室溫條件下震盪混勻，平衡30min。
步驟三：將充分震盪混勻平衡後的磁珠加入待純化酶反應或PCR反應產物溶液中。磁珠加入體積分別參考圖1和圖2，若待純化產物體積不足，可用純化水或10mM Tris-HCl（pH8.0）補充至相應體積。
步驟四：用移液器反復吹打10次，將磁珠懸浮液和PCR產物或者酶反應物充分混勻，室溫條件下靜置5min。
步驟五：將反應板放置在磁力架上，靜置2min，待溶液澄清後將上清吸走，轉入廢液桶內。
步驟六：向反應板中加入200μL新鮮配置的70%的乙醇，室溫靜置30s。靜置結束後將乙醇吸走，轉入廢液桶內。操作環節不可將反應板從磁力分離架上拿下或將磁珠吹散。
步驟七：重復步驟六。
步驟八：保持反應板置於磁力架上狀態，室溫開蓋晾乾2min以去除殘存的乙醇。
步驟九：將反應板從磁力架上取下來，加入50μL洗脫液，移液器反復吹打10次混勻，室溫靜置3min。洗脫液加入量根據實際需要而定，但應不少於5μL。
步驟十：將反應板重新放置在磁力架上，室溫靜置1min，上清液即純化後的DNA產物。
步驟十一：將上清液轉入新的反應管或者反應板中，供下一步反應或檢測使用。

『捌』 核酸檢測步驟

常規核酸檢測樣本類型包括咽拭子、鼻拭子、痰液、支氣管灌洗液、肺泡灌洗液等。權重過程如下：

在獲得患者樣本後，應盡快進行檢測。如果樣品需要運送到不能立即測試，他們應當根據指令和打包在低溫送到一個特殊的測試機構測試。檢測機構收到樣品後，應從樣品中進行核酸提取，核酸提取試劑應使用經批準的《產品規范》規定的核酸提取試劑盒。

病毒RNA需要首先轉錄成cDNA，然後擴增檢測。PCR擴增和檢測應使用批準的產品規范中規定的熒光定量PCR儀。通過熒光定量PCR獲得的樣本Ct值，可以判斷患者樣本是否含有新型冠狀病毒。

(8)核酸檢測試劑使用培訓方案擴展閱讀：

目前臨床核酸檢測主要採用咽喉拭子檢測。步驟是讓被測者用淡鹽水漱口，去除口腔中的細菌，然後將標簽貼在標本容器上。

通知檢查員咽拭子培養的目的和方法，點燃酒精燈，檢查人員收取的張開嘴巴，頭發啊，完全暴露的喉嚨，培養管長消毒棉簽輕輕動作敏感和擦兩邊的齶扁桃體拱門和咽分泌物，抽樣已經完成，在試管口在酒精燈火焰消毒，然後插入試管擦洗，插入後及時檢驗。

核酸檢測是目前診斷病原體最重要的依據，是診斷病原體的重要依據。例如，對於目前COVID－19的檢測，病毒核酸檢測仍是診斷的金標准。