核酸检测试剂使用培训方案

『壹』 核酸检测具体步骤

1、核酸提取使用硅胶柱离心、磁性硅胶颗粒分离方法以及自动化仪器等商品化试剂或设备并按说明书操作。提取RNA时应注意防止RNA降解。DNA应置于-20℃保存，RNA和需长期保存的DNA应置于-80℃保存。

2、逆转录合成cDNA。逆转录cDNA合成反应需使用逆转录引物、dNTPs、逆转录酶、RNA酶抑制剂、DTT、缓冲液和适量无RNA/DNA酶的超纯水以及RNA模板。在扩增仪或水浴箱中，在规定的温度和时间下进行逆转录反应。

3、PCR扩增反应PCR反应需使用引物、dNTPs、DNA聚合酶、缓冲液、和适量无RNA/DNA酶超纯水、以及模板。在扩增仪中，按照设定的程序进行扩增。使用二次扩增的套式PCR扩增方法。

4、扩增产物定性分析；扩增产物常用分析方法是琼脂糖凝胶电泳法，与分子量标准比较，判断扩增片段是否在预期的分子量范围内。其它扩增产物分析方法还有限制性内切酶酶切分析、特异性探针杂交分析以及DNA序列分析等。

5、结果判定和完成报告单：每一次检测需同时做两个阳性对照、两个阴性对照，只有阳性对照扩增出预期的片段、阴性对照没有扩增出任何片段、双份平行样品结果一致的情况下实验才成立，可以作出核酸阳性或阴性反应结果的判定。

(1)核酸检测试剂使用培训方案扩展阅读：

检测新型冠状病毒特异序列的方法最常见的是荧光定量PCR。因PCR反应模板仅为DNA，因此在进行PCR反应前，应将新型冠状病毒核酸逆转录为DNA。在PCR反应体系中，

包含一对特异性引物以及一个Taqman探针，该探针为一段特异性寡核苷酸序列，两端分别标记了报告荧光基团和淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；

如反应体系存在靶序列，PCR反应时探针与模板结合，DNA聚合酶沿模板利用酶的外切酶活性将探针酶切降解，报告基团与淬灭基团分离，发出荧光。

每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子产生。荧光定量PCR仪能够监测出荧光到达预先设定阈值的循环数与病毒核酸浓度有关，病毒核酸浓度越高， Ct值越小。不同生产企业的产品会依据自身产品的性能确定本产品的阳性判断值。

『贰』 核酸检测流程是什么

1、核酸提取使用硅胶柱离心、磁性硅胶颗粒分离方法以及自动化仪器等商品化试剂或设备并按说明书操作。提取RNA时应注意防止RNA降解。DNA应置于-20℃保存，RNA和需长期保存的DNA应置于-80℃保存。

2、逆转录合成cDNA。逆转录cDNA合成反应需使用逆转录引物、dNTPs、逆转录酶、RNA酶抑制剂、DTT、缓冲液和适量无RNA/DNA酶的超纯水以及RNA模板。在扩增仪或水浴箱中，在规定的温度和时间下进行逆转录反应。

3、PCR扩增反应PCR反应需使用引物、dNTPs、DNA聚合酶、缓冲液、和适量无RNA/DNA酶超纯水、以及模板。在扩增仪中，按照设定的程序进行扩增。使用二次扩增的套式PCR扩增方法。

4、扩增产物定性分析；扩增产物常用分析方法是琼脂糖凝胶电泳法，与分子量标准比较，判断扩增片段是否在预期的分子量范围内。其它扩增产物分析方法还有限制性内切酶酶切分析、特异性探针杂交分析以及DNA序列分析等。

5、结果判定和完成报告单：每一次检测需同时做两个阳性对照、两个阴性对照，只有阳性对照扩增出预期的片段、阴性对照没有扩增出任何片段、双份平行样品结果一致的情况下实验才成立，可以作出核酸阳性或阴性反应结果的判定。

『叁』 核酸检测流程

1、首先，医务人员会使用咽拭子擦拭受检者鼻腔或者喉咙扁桃体处，采集唾液分泌物，这个过程其实蛮疼的。

『肆』 高铁站核酸检测流程

对于一般的核酸检测在采样之后，都是在第二天才能收到结果，这都算是比较快的。因为核酸检测，其中包括了很多步骤和很多实验室的工作。

比如在采样之后，如果是血液、咽拭子等，当然是怕这些样本降解。如果是RNA可能是比较不稳定，需要快速运输到检测的实验室之后进行了很多处理，包括了前处理，然后裂解、打开、离心，上清液进行PCR就聚合酶链式反应等等。

这些都有可能有很长的时间，比如PCR的反应时间可能是6~8小时，然后才能读取结果。读取之后有初步的结果还要进行审核，这流程整个需要很长时间。而审核的时候，如果要是再有问题，可能还要留出复检的时间，不可能很快的下发结果。所以一般检测，大约在第二天能获得结果。

核酸检测操作过程需要几个小时，一般1-2天出结果。目前新冠病毒的核酸检测主要是使用RT-PCR法检测试剂盒，操作是：1、检测人员先用核酸提取试剂盒提取患者标本里的核酸。2、把提取到的核酸放进检测试剂中复制。3、结果判定。第1步和第2步都有严格的操作流程和操作条件，整体耗时在1-4小时之间，最后判定结果。医院的检测是上午统一上机，到统一出结果差不多5个小时，也就到了下午，然后统一上报，不会随到随检。所以下午或晚上所送的标本是第2天做，有的医院自己不具备实验室条件，不能做，需送到上一级实验室做，保守估计时间是1-2天。

『伍』 核酸检测注意事项

在核酸检测前两小时，请勿进食，为避免影响检测结果，采样前30分钟请勿吸烟、喝酒和嚼口香糖；为降低交叉感染风险，所有检测者需配戴口罩并备一个用，在采样结束后进行替换。

在采集鼻咽拭子前检测者应告知采集人员是否存在鼻中隔弯曲或有鼻腔手术史，过程中可能出现鼻部酸痒感，刺激打喷嚏，请立即用纸巾或手肘遮挡。采样时人与人之间请保持一米以上距离。

(5)核酸检测试剂使用培训方案扩展阅读

对于新型冠状病毒的核酸检测，首先根据试剂盒说明书”样本要求“部分进行样本采集，常规的样本类型包括咽拭子、鼻拭子、痰液、支气管灌洗液、肺泡灌洗液等。

获得患者样本后，需尽快进行检测，如无法立即检测需要转运的样本，应按照说明书的要求进行低温封装，并送到专门的检测机构进行检测。检测机构收到样本后，对样本进行核酸提取，核酸提取试剂应使用批准产品说明书中指定的核酸提取试剂盒。

病毒RNA需要首先逆转录为cDNA，再进行扩增检测。PCR扩增和检测应使用批准产品说明书中指定的荧光定量PCR仪，通过荧光定量PCR所得到的样本Ct值的大小，可以判断患者样本中是否含有新型冠状病毒。

『陆』 核酸检测培训内容

为了更好地配合新冠疫情防控工作，确保临床实验室能够规范、安全、有效地开展新冠病毒等感染性病原体核酸检测工作，受江苏省卫生健康委的委托，于2020年4月28日-29日通过网络直播的形式顺利召开“新冠病毒核酸检测实验室技术人员培训班”。全省二级及以上医疗机构和医学独立实验室共有1881人报名参会，其中1513人参与了在线答题，1422人理论培训成绩合格。

本次培训班邀请了省内专家针对新冠及感染性疾病的检测作专题报告，内容涉及感染类疾病核酸检测的基本原理、主要技术平台原理及应用、规范化实验室的建立及其管理、生物安全防护和院内感染控制、技术操作规范、质量控制措施、结果的正确解读和报告等多个方面。江苏省临床检验中心主任许斌教授作“新冠病毒检测法规与策略”的报告，讲解了与新型冠状病毒相关的法规文件，强调单个标志物、单次试验是初步结果，尚需要对病毒标志物进行验证和确认，并介绍了新冠检测规范化报告的流程，特别指出新冠病毒不能进行混样检测。

江苏省疾病预防控制中心职业病防治所书记谢景欣教授作“感染类疾病核酸检测实验室生物安全管理”的报告，从实验室的标识、物理防范措施、电源插座、通讯设备、应急处置、生物安全柜、实验室压力、消毒灭菌和废弃物处置等多个方面讲解了实验室的生物安全管理及存在的误区。南京大学医学院附属鼓楼医院感染管理办公室主任姜亦虹教授作“新冠疫情的院感防控”的报告，介绍了新冠病毒感染流行病学特点，讲解了新冠检测的实验室生物安全措施及注意事项，最后就新冠检测中的常见问题进行了解答。东南大学附属中大医院主任吴国球教授作“新冠核酸分析前样本的采集、处理和核酸提取”的报告，从检验申请、标本采样、样本的转运、接收和保存、标本的前处理以及RNA的提取纯化方法5个方面进行了讲解，他讲道选择合适的采样管，注意采样时机和部位可减少假阴性，推荐使用56℃ 30分钟的前处理以减少实验室工作人员的职业暴露。东部战区总医院药理科主任周国华教授作“新冠病毒核酸检测方法、原理、特征与临床应用”的报告，讲解了PCR法原理、发展历程和在新冠病毒核酸检测中的应用，并介绍了高通量基因检测、第三代测序技术、恒温扩增等多种新技术、新方法的原因和临床应用。江苏省临床检验中心赵建华教授作“临床基因扩增检验实验室的规范建设和质量保证”的报告，从验收流程、实验室设置、仪器设备和人员4个方面讲解了实验室的规范化建设，然后又从试剂的选择与性能验证、工作程序的标准化、质量控制以及结果的判断与报告等多个方面讲解了新冠核酸检测的质量保证。

本次培训班是感染病专项的培训班，经过理论培训且成绩合格的技术人员还需要到已获得“临床基因扩增检验实验室（感染病相关基因项目）验收合格证”的实验室进行实验培训，由带教实验室老师和指定负责人签名证实，将实验记录和工作证明扫描后发送至[email protected]，经省临检中心审核通过后才可以拿到合格证书，取得合格证的人员只可以从事感染病基因检测相关的检验项目。

『柒』 核酸纯化试剂的使用方法和注意事项有哪些

使用方法因厂家不同而不同，下面是一氪生物技术的核酸纯化试剂使用方法及注意事项，供参考：

步骤一：使用无水乙醇与纯化水配制70%乙醇备用。
步骤二：从2-8℃冰箱中取出磁珠悬浮液，在室温条件下震荡混匀，平衡30min。
步骤三：将充分震荡混匀平衡后的磁珠加入待纯化酶反应或PCR反应产物溶液中。磁珠加入体积分别参考图1和图2，若待纯化产物体积不足，可用纯化水或10mM Tris-HCl（pH8.0）补充至相应体积。
步骤四：用移液器反复吹打10次，将磁珠悬浮液和PCR产物或者酶反应物充分混匀，室温条件下静置5min。
步骤五：将反应板放置在磁力架上，静置2min，待溶液澄清后将上清吸走，转入废液桶内。
步骤六：向反应板中加入200μL新鲜配置的70%的乙醇，室温静置30s。静置结束后将乙醇吸走，转入废液桶内。操作环节不可将反应板从磁力分离架上拿下或将磁珠吹散。
步骤七：重复步骤六。
步骤八：保持反应板置于磁力架上状态，室温开盖晾干2min以去除残存的乙醇。
步骤九：将反应板从磁力架上取下来，加入50μL洗脱液，移液器反复吹打10次混匀，室温静置3min。洗脱液加入量根据实际需要而定，但应不少于5μL。
步骤十：将反应板重新放置在磁力架上，室温静置1min，上清液即纯化后的DNA产物。
步骤十一：将上清液转入新的反应管或者反应板中，供下一步反应或检测使用。

『捌』 核酸检测步骤

常规核酸检测样本类型包括咽拭子、鼻拭子、痰液、支气管灌洗液、肺泡灌洗液等。权重过程如下：

在获得患者样本后，应尽快进行检测。如果样品需要运送到不能立即测试，他们应当根据指令和打包在低温送到一个特殊的测试机构测试。检测机构收到样品后，应从样品中进行核酸提取，核酸提取试剂应使用经批准的《产品规范》规定的核酸提取试剂盒。

病毒RNA需要首先转录成cDNA，然后扩增检测。PCR扩增和检测应使用批准的产品规范中规定的荧光定量PCR仪。通过荧光定量PCR获得的样本Ct值，可以判断患者样本是否含有新型冠状病毒。

(8)核酸检测试剂使用培训方案扩展阅读：

目前临床核酸检测主要采用咽喉拭子检测。步骤是让被测者用淡盐水漱口，去除口腔中的细菌，然后将标签贴在标本容器上。

通知检查员咽拭子培养的目的和方法，点燃酒精灯，检查人员收取的张开嘴巴，头发啊，完全暴露的喉咙，培养管长消毒棉签轻轻动作敏感和擦两边的腭扁桃体拱门和咽分泌物，抽样已经完成，在试管口在酒精灯火焰消毒，然后插入试管擦洗，插入后及时检验。

核酸检测是目前诊断病原体最重要的依据，是诊断病原体的重要依据。例如，对于目前COVID－19的检测，病毒核酸检测仍是诊断的金标准。