卫生院o157h7培训计划

① 大肠杆菌O157:H7的简介

肠出血性大肠杆菌（EHEC）是能引起人的出血性腹泻和肠炎的一群大肠埃希氏菌。以O157:H7血清型为代表菌株。

② 什么食品中有大肠杆菌O157:H7

“O157流行特点：
1.季节性：多发生于夏秋两季6-9月为发病高峰。11月至次年2 月极少发病。
2.地区分布：多发生于发达国家，主要以散发性为主。
3.易感人群：儿童5-9岁、老人50-59岁明显高于其它年龄组，最小3个月，最大85岁。
4.宿主：农场动物牛、羊、猪、鸡、马、鹿、鸽子、海鸥等均可能为大肠杆菌O157的携带者。
5.食源性E.coli O157:H7感染：牛肉、生奶、鸡肉及其制品，蔬菜、水果及制品等均可引起污染，其中牛肉是最主要的传播载体。”

但是目前正规食品，不会检测出o157，你只能去买菌种保藏中心去购买。而且o157会致死，实验室级别不够，很容易导致o157扩散，做实验时，要多加小心，消毒次数要频繁。

③ 大肠杆菌O157:H7的致病性

(2)出血性结肠炎(HC)
(3)溶血性尿毒综合症(HUS)
(4)血栓性血小板减少性紫癜(TTP)
E.coliO157:H7的感染剂量极低。伏期为3-10天，病程2-9天。通常是突然发生剧烈腹痛和水样腹泻，数天后出现出血性腹泻，可发热或不发热。部分患者可发展为HUS、TTP等，严重者可导致死亡。

④ 下列哪一类的大肠埃希菌中含有O157:H7这一血清型

正确答案:D
解析：肠出血性大肠埃希菌(EHEC)中的O157:H7可引起出血性大肠炎和溶血性尿毒综合征(HUS)
。

⑤ 大肠杆菌O157:H7的E.coliO157:H7的检验

(一)国标法（常规法）
1、增菌培养
2、分离
3、鉴定
(二)金标试纸法
该方法是中华人民共和国卫生部频布的“关于全国肠出血性大肠杆菌O157：H7感染性腹泻应急处理预案”中的指定方法。
将样品经过特殊的前增菌及增菌后，取120ul的增菌培养液放入试纸夹的样品槽中，样品由于毛细管作用移至反应区，反应区中含有特殊的抗体(E.coliO157:H7抗体)它与胶体金颗粒共轭偶联。如果样品中存在抗原，将同金标抗体结合形成抗原-抗体复合物，沿着硝酸纤维素膜向前移动至含有固定的抗E.coliO157:H7抗体区域(T区)，金标免疫的复合物与该区域的抗抗体发生特异性结合形成一条可见的线。其它的样品继续移动到膜的未端，最终进入废物池被遗弃。
反应区也含有金标结合的一种专利抗原(颜色指示剂)，不管样品中有没有E.coliO157:H7抗原，它都被样品洗脱。金标控制指示剂通过膜移动到阴性控制区与专利抗体结合形成一条可见的线。无论样品中有没有E.coliO157:H7抗原，控制线都将在控制区(C区)形成，来确保试验正常进行。
增菌液滴入8-10分钟后，观察试纸C区和T区有无明显的线。在C和T区都有可见的线，则结果为阳性。C区有线、T区无线，则结果为阴性。如C区无线，无论T区有没有线，则实验无效。
（三)ISO－GRID检测系统
ISO－GRID检测系统是一种基于疏水性网膜（HGMF）的过滤系统。该系统通过使用这种含有1600个小方格的滤膜，来对微生物进行检测或计数。
首先，稀释的样品通过5um的不锈钢预过滤器过滤，过滤掉可能引起微生物分析误差的样品残渣颗粒。
然后，样品通过流水的滤膜过滤。再将滤膜放在特异性的琼脂培养板上培养，以检测目标微生物。培养完成后，在膜上检测目标微生物，并记录阳性区域的数量。
滤膜不会染上琼脂培养基的颜色，从而很容易地区别微生物，并进行鉴别和记数。此方法快速简便，重复性好，而且，除大肠杆菌O157﹕H7外，还适用于沙门氏菌、酵母、霉菌、大肠菌群及大肠杆菌的检测和计数。
(四)单克隆酶联免疫分析筛选方法
该方法是对所有食品E.coliO157:H7的存在进行筛选，不是确证试验，因为试验中所用的单克隆抗体可能与少部分的非E.coliO157:H7有交叉反应。
阳性的检疫结果应是客观的，必须配有450nm滤光片的光度计来进行测试。只有当阴性和阳性对照均有可接受的光密度读数时，阳性结果才是有效的。
原理E.coliO157:H7原的检测是基于用特异性单克隆抗体进行的酶免疫分析(EIA)。用抗E.coliO157:H7抗原的单克隆抗体包被于聚苯乙烯微量小孔的内表面，将样品和对照加入小孔中。样品中如有E.coliO157:H7抗原存在，则将被吸附在孔上的特异性抗体吸收。冲洗后，加入结合剂与被抗体吸收的E.coliO157:H7抗原结合。再冲洗小孔，除去未结合的结合剂，然后再加入酶底物。当用终止液终止反应时，出现的蓝色则转变为黄色。样品中是否有E.coliO157:H7抗原取决于颜色产生的光密度。
(五)自动酶联荧光免疫检测系统（VIDAS）筛选法
此E.coliO157:H7的抗原鉴别是基于在VIDAS仪器内进行的酶联荧光免疫分析。像吸液管的装置是固相容器（SPR），在分析中既作为固相也作为吸液器。SPR包被有高特异的单克隆抗体混合物。将一定量的增菌肉汤加入试剂条，肉汤中的混合物在特定时间内循环于SPR内外。如果有E.coliO157:H7抗原存在则与包被在SPR内的单克隆抗体结合，其他没有结合上的化合物被冲洗掉。结合有碱性磷酸酶的抗体在SPR内外循环与结合在SPR内壁上的E.coliO157:H7抗原结合，最后的冲洗步骤将没有结合的接合剂冲洗掉。底物—4-甲基伞形磷酸酮被SPR壁上的酶转换成荧光产物—4-甲基伞形酮。荧光强度由光学扫描器测定。实验结果由计算机自动分析，产生基于荧光测试的试验值与标准相比较后打印出每一个被测样品的阳性或阴性结果报告。
(六)E.coliO157:H7快速酶触反应显色培养基法
快速酶触反应是根据细菌在其生长繁殖过程中可合成和释放某些特异性的酶，按酶的特性，选用相应的底物和指示剂，将它们配制在相关的培养基中。根据细菌反应后出现的明显的颜色变化，确定待分离的可疑菌株，反应的测定结果有助于细菌的快速诊断。这种技术将传统的细菌分离与生化反应有机的结合起来，并使得检测结果直观，成为今后微生物检测发展的一个重要发展方向。
(七)DNA探针技术
DNA探针技术是最新发展起来的一项特异、灵敏、快速的检测方法，但因有一定比例的假阳性反应，故所有阳性结果必须用标准的培养方法加以确证，
原理用特异性的DNA探针进行E.coliO157:H7核糖体RNA（rRNA）的检测。待检样品经前增菌、选择性增菌和后增菌后，溶解细菌。加入标记好的E.coliO157:H7异性的DNA探针用于液相杂交。如果待检样品中存有E.coliO157:H7的rRNA，荧光素标记的检测探针和多聚脱氧腺嘌呤核苷酸(polydeoxyadenylicacid,polydA)末端捕获探针将与目标rRNA序列进行杂交。然后把包被有多聚脱氧胸腺嘧啶核苷酸(polydeoxyadenylicacid,polydT)(固相)的测杆插入杂交溶液。PolydA和poldT之间进行碱基配对，便于探针捕获：目标杂种核酸分子结合在固体载体上，未接合的探针被冲洗掉。测杆被培养在辣根过氧化物酶-抗荧光素接合剂中。接合剂与存在于杂交检测探针上的荧光素标记物结合，未结合的剂被冲掉。并将测杆培养于酶底物-色原溶液中，辣根过氧化物酶与酶底物反应，将色原转变为蓝色化合物。一旦遇酸反应便停止，色原的颜色变为黄色。在450nm处测量吸收值，吸收值大于临界则表明在待检的样品中存有E.coliO157:H7。
(八)聚合酶链反应(PCR)技术
PCR技术原理为提高DNA探针的敏感性，可先将靶DNA序列扩增，增加DNA数量，使其达到足够的检测量，若反应以动力学为基础，则能定量分析。1983年Millus和Cetus发明了最基本的扩增DNA或增加样品中特殊核苷酸片段数量的方法-聚合酶链反应即PCR法。PCR法建立在三步重复发生反应的基础上。①通过热处理将双股DNA变性裂解成单股DNA；②退火延伸引物至特异性寡核苷酸上；③酶促延伸引物与DNA配对合成模板，引物退火，变性DNA片段，引物杂交形成的模板可参与再次反应。溶液中核苷酸通过酶聚合成相互补对的DNA片段，并能重新裂解成单股DNA成为下次PCR复制的模板。因此每次循环特异性DNA将以双倍量增加。典型扩增经过20～40次循环能引起100万倍的扩增。在PCR反应中引人Taq聚合酶使反应得以半自动化和简便反应程序。用扩增DNA进行的PCR反应具有无与伦比的优越性。

⑥ E.coli O157:H7 O和H都分别代表什么后面的数字呢

O是菌体抗原,也就是细菌脂多糖的外层部分.
H是鞭毛抗原.
数字是代表这些抗原的种类编码.就跟甲型H1N1病毒的数字一样.

⑦ 为什么CDC提出应将大肠埃希菌O157：H7列为常规检测项目

EHEC的血清型＞50种,最具代表性的是O157:H7,在北美许多地区, O157:H7占肠道分离病原的第二位或第三位(多于志贺菌和耶尔森菌),是从血便中分离到的最常见的病原菌,分离率占血便的40%,6、7、8三个月O157:H7感染的发生率最高。 且O157是4岁以下儿童急性肾功能衰竭的主要病原菌,所以CDC提出应将大肠埃希菌O157:H7列为常规检测项目。

⑧ 大肠埃希氏菌O157：H7/NM，其中NM是什么意思

non motile
不运动的，一种表型的描述，和H7差不多，表示一种分型

⑨ 大肠杆菌O157 H7食物中毒的发生与人的饮食习惯有关吗

大肠杆菌O157 H7是一种能产生毒素的大肠杆菌，是重要的导致食物中毒的病菌，通过各类熟肉制品、冷荤、牛肉、生牛奶、乳酪及蔬菜、水果、饮料等传染给人，能引起出血性腹泻及溶血性尿毒综合征，严重的甚至死亡。本菌主要宿主是牛，猪、禽、羔羊的肉制品也能分离出此菌。随着人们西式餐饮方式的增加，本菌引起的食物中毒在全世界越来越多。O157 H7主要存在于未煮熟煮透煮的牛肉等食品中，所以，煮熟肉、奶等食品，才可以减少O15 H7食物中毒的发生。

⑩ 大肠杆菌O157:H7 中的O,和H分别表示什么意思

O是指O抗原，也就是体细胞抗原，是包埋在细菌细胞壁中的脂多糖类；H是指H抗原，也就是鞭毛抗原，是蛋白质类，具有免疫性的结构。除此之外，还有K抗原，也就荚膜抗原，大部分是多糖；以及M抗原，类粘蛋白，多糖类。
大肠杆菌根据这四种不同抗原类型来进行血清学上的分类和分析。